植物专业毕业实习报告

实习报告

题目：草莓的组织培养与相关培养基的制备

学院：植物保护学院

专业班级：动植物检疫专0402班

学号：20XX033020203

学生姓名：陈英化

指导教师：赵岩

二〇〇七年六月一日

草莓的组织培养与相关培养基的制备

本次实习主要是学习草莓培养基的制备和草莓的组织培养法，为以后从事草莓方面的工作与研究打基础

1　材料和方法：

1.1　供试植物材料：

草莓品种：（1）童子Ⅰ号：　取自河北农业大学草莓试验田

（2）达塞莱克特：取自河北农业大学草莓试验田

1.2　草莓组培苗的繁殖：

1.2.1MS培养基的制备

（一）母液的配制：（参见附录一、二）

（1）1mol·L-1酸碱配制：称取4gNaOH，溶解后定容于100ml去离子水中，即配成1mol·L-1NaOH溶液；量取8.4ml浓盐酸（12mol·L-1），加去离子水定容至100ml，即配成1mol·L-1的盐酸溶液。

（2）大量元素母液配制（H4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O）一定要分别称量，分别溶解，再定容。倒入贮液瓶中，贴好标签（日期、种类、倍数），放入冰箱内（2~4℃）或常温。

（3）微量元素母液配制（MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O）分别称量，分别溶解（用蒸馏水或去离子水），定容。贴标签（日期、种类、倍数），放入冰箱内（2~4℃）或常温。

（4）铁盐母液配制（FeSO4·7H2O、Na2EDTA）：5.57ｇ硫酸亚铁和7.45ｇ乙二胺四乙酸钠，分别用450ml去离子水（或蒸馏水）溶解，分别适当加热并不停搅拌，待分别溶解后，再将2种溶液混合在一起，调整PH值到5.5，最后加蒸馏水或去离子水定容于1000ml，倒入棕色瓶中，贴好标签放入冰箱保存。

（5）有机物母液配制：（肌醇、烟酸（VB3烟酸胺素（VB1）、烟酸吡多醇（VB6）、甘氨酸）称量，分别溶解，用蒸馏水或去离子水定容，放入细口瓶中备用，贴好标签放入冰箱保存。

（6）配制0.2mg·L-1BA（6-苄基氨基嘌呤）：称20mg加少量1mol·L-1的盐酸溶解，然后用加热的蒸馏水定容100ml，配制1L培养基吸取量为1ml。

（7）配制0.5mg·L-1IBA（吲哚丁酸）：称50mg加少量95％乙醇溶解，然后用加热的蒸馏水定容100ml，配制1L培养基吸取量为1ml。

（二）培养基的配制：

（1）称蔗糖（分化培养基用30ｇ；生根培养基用20ｇ）、琼脂5ｇ用凉水调成糊状。

（2）取一定量的去离子水或自来水（一般是培养基量的80％～90％），加入不锈钢锅内，用电磁炉加热。母液依次按NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O；MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O；FeSO4·7H2O、Na2EDTA；肌醇、烟酸（VB3）、烟酸胺素（VB1）、烟酸吡多醇（VB6）、甘氨酸顺序吸取。

（3）水开后，加入蔗糖和琼脂，不断搅拌，开锅后停止加热。

（4）将量取好的母液倒入上述已加热的锅内，不断搅拌，使其均匀溶解。

（5）定容（考虑由温度引起的体积变化）

（6）调整培养基的PH值为5.8～6.0（用1mol·L-1NaOH溶液和1mol·L-1的盐酸溶液）。

（7）培养基的分装每40ml装入100ml三角瓶，用封口膜封瓶口，再用牛皮纸将瓶口包扎，对培养基及时做好标记。

（8）培养基的灭菌和保存：在压力表达0.105～0.120MPa时，灭菌20min，放置2～3d进行观察，若无污染迹象则可使用［3］。

（9）分化培养基：MS培养基，附加BA0.5mg·L-1，蔗糖30g，琼脂5g；生根培养基1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+琼脂5g。

1.2.2外植体的生长与分化

取匍匐茎顶梢剪去叶片，在自来水下冲洗干净，取出已长出的小叶。在超净工作台上，用70％酒精杀菌30s，用无菌水冲洗3次（3min/次），再用0.1%升汞泡7~8min，用无菌水冲洗3~5次（5~10min/次）。用无菌尖头镊子将匍匐茎茎尖外面的包叶剥去，用镊子将幼叶一一剥去，切取尽可能小的茎尖（0.1~0.3mm），置于分化培养基中（MS培养基，附加BA0.5mg·L-1，蔗糖30g，琼脂5g）于光照度3000lx，光周期8~10h，温度20~28℃条件下培养20d左右［1］。

1.2.3试管苗的生根

取40mlMS生根培养基（1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+琼脂5g）置于100ml三角瓶中，每瓶接种4株长势基本相同的试管苗，于光照4000lx，光周期14h，温度20~27℃条件下培养约30d［2］。

参　考　文　献

[1]牛建新，鲁晓燕，于艳华．外植体和培养因子对草莓不定芽诱导的影响［J］．北方园艺，1999，3：30～31．

[2]甄文超，曹克强，代　丽，等．连作草莓根系分泌物自毒作用的模拟研究［J］．植物生态学报，20XX，28(6)：828～832．

[3]李　云　主编，林果花菜组织培养快速育苗技术［M］．中国林业出版社．20XX．6．

[4]沈德绪．果树育种学［M］．上海：上海科学技术出版社，1980．



附录1—草莓组织培养MS培养基配方［4］

FormulaofMSculturemediumusedinstrawberrytissueculture

母液 Solution	成分 Composition	浓度（mg/L） Concentration	母液 Solution	成分 Composition	浓度（mg/L） Concentration
Ⅰ	KNO3	1900	Ⅳ	Na2EDTA	37.3
	MgSO4·7H2O	370		FeSO4·7H2O	27.8
	NH4NO3	1650	Ⅴ	VB1	0.1
	KH2PO4	170		VB6	0.5
Ⅱ	MnSO4·H2O	16.9		烟酸	0.5
	ZnSO4·7H20	8.6		肌醇	100
	H3BO3	6.2		甘氨酸	2
	KI	0.83	Ⅵ	Cacl2·2H2O	440
Ⅲ	Na2MoO4·2H2O	0.25
	CuSO4·5H2O	0.025	Ⅶ	BA	0.1～0.3
	CocL2 ·6H2O	0.025
			Ⅷ	IBA	0.2～0.7

附录2—各成份在母液配制中称取量及培养基配制时吸取值：

标号	成份	配100ml的母液(200倍)称取量（mg）	配1L培养基吸取量(ml)
1	NH4NO3	33,000	5
2	KNO3	38,000	5
3	KH2PO4	3,400	5
4	MgSO4·7H2O	7,400	5
5	CacL2·2H2O	8,800	5
6	MnSO4·H2O	676	10
7	ZnSO4·7H20	344	10
8	H3BO3	248	10
9	KI	33.2	10
10	Na2MoO4·2H2O	10	10
11	CocL2 ·6H2O	1	10
12	CuSO4·5H2O	1	10
13	FeSO4·7H2O	556	5
14	Na2EDTA	746	5
15	肌醇	2,000	5
16	烟酸	10	5
17	VB1	2	5
18	VB6	10	5
19	甘氨酸	40	5

心得与体会

草莓属于蔷薇科草莓属多年生草本植物,园艺学上分类属于浆果类,草莓果实艳丽,柔软多汁酸甜可口,芳香浓郁,营养丰富的高级果品,浆果中含糖6%-12%,含各种有机酸1.0%-1.5%.含蛋白质0.4%-0.8%,每一百克果实中含维生素C50-100毫克,比柑橘高两倍,比苹果葡萄高十倍,草莓中还含有其他种类的维生素和磷铁等矿物质,无论从风味上来看,还是从营养价值上来看,草莓都当之无愧为果中的上品,所以有人称草莓为“水果皇后”

通过本次实习使我对草莓的国内外科研发展史和生产现状有所了解；对草莓的种类和品种有初步的认识；对草莓的对环境条件的要求有所了解；对草莓的繁殖和育苗尤其是草莓的组织培养法有一定的认识；对草莓的主要病虫害的及其防治有一定的了解；为我们以后从事草莓方面的工作与研究打下夯实的基础。

草莓的国内外科研发展史和生产现状

一、草莓的国外科研发展史和生产现状

草莓植物起源于亚洲每周和欧洲，其栽培品种繁多，分布于世界各地，西方各国大约是在14世纪末开始栽培林丛莓，15-17世纪栽培短蔓莓和麝香莓，1714年荷兰从南美引进智利莓，1750年法国著名园艺家esne将智利莓和深红莓杂交定名为凤梨莓，即世界栽培种的诞生。此后在西欧以英法为中心的普遍开展草莓的杂交种的培育，使草莓在世界各地迅速发展起来。

到1990年全世界共有46个国家和地区生产草莓，世界总产量为2357129吨，美国草莓的产量为541033吨，居世界第一位，1920年美国农业部所属的农业拭验站开始改进草莓的总的园艺性状的育种工作。其中佩茨维尔农业研究中心和马里兰州大学合作进行草莓的抗红中柱病的育种，已选出60个有抗性的单系。

日本15世纪前开始食用野生草莓，18世纪末从荷兰的西方诸国引进栽培种，19世纪初从美国引进六个品种，第二次世界大战以后日本大量培养了本国的草莓品种。

在欧洲，1982年意大利的草莓产量居首位，年产量为247000吨，居世界第二位，波兰居欧洲第二位，年产量为185000吨，居世界第四位。

二、草莓的国内科研发展史和生产现状

我国16世纪的《本草纲目》内有关草莓的记载：就地生蔓，节接生根，每枝三叶，叶有齿剑四五月开花，五月结实鲜红……。

我国虽然也是野生草莓的发源地之一，但大果型的草莓大部分从国外引进，而且草莓培育开始较晚，在见到的最早的记载是1915年帝俄侨民从莫斯科引进5000棵胜利品种到黑龙江亮子坡栽培，1918年又有一铁路司机从高加索引入胜利栽培，1915年在河北由法国神父从法国引进鸡心品种到正定天主教堂（石家庄果树研究所）栽培。20世纪50年代沈阳农学院（沈阳农业大学前身）北京植物园从苏联东欧国家引进大量世界各地的品种，河北省农林科学院石家庄果树研究所从1980年开始搜索草莓品种资源，和开展新品种选育工作，到目前已经保存300种国内外的草莓品种，1981年以后，黑龙江，吉林，河北，山西，山东，上海，天津等直辖市的一些科研单位和大专院校陆续开展了草莓的科学研究工作，分别对草莓的品种选育，秧苗繁殖，栽培技术，形态生理，病虫害的防治等方面进行了研究。

草莓的种类和品种

草莓植物起源于亚洲、美洲和欧洲，在亚洲有八种，按草莓的基本染色体有二倍体、四倍体、六倍体、八倍体之分。其生理生态特性各异。

主要种类：野生草莓，西藏草莓，黄毛草莓，东方草莓，西南草莓，五叶草莓，纤细草莓，西域草莓，智利草莓，椭圆草莓，短蔓草莓，麝香草莓，西美洲草莓。

草莓的栽陪种类繁多，当今世界有2000多种，但大面积栽培仅几十种，我国目前栽培草莓的品种大体有三部分。一栽培历史较长的老品种，二国内选育的品种，三引进的国外品种。有关草莓的种类和品种参见《草莓生产技术大全》郝保春主编，中国农业出版社出版。

草莓对环境条件的要求

对温度的要求：草莓植株生长的适宜温度为18-23℃。春季生长如遇到-7℃的低温会受冻，-10℃时大多数植株会冻死，根系在2℃开始活动，10℃时开始形成新根根系的最适生长温度15-20℃，地上部在5℃时开始萌芽，茎叶开始生长到15℃时为缓慢生长期，草莓的生长发育和光合作用的最适温度20-25℃，5℃以下是草莓休眠的所需的温度。

对光照的要求；草莓不同的发育时期对光照的要求不同，在开花和结果时期，和旺盛生长期适宜在12-15小时的长日照，在花芽分化期要求10-12小时的短日照，和较低的温度，18小时的日照下生长旺盛，但不能形成花芽，甚至不能开花结果，草莓在花芽分化前经受短日照，在花芽分化以后经受长日照处理能促进花芽发育和开花。

对水分的要求：草莓的整个生长季节土壤的含水量为60%左右，便可以满足其生长发育的要求。

对土壤的要求：在砂质土壤上如果多施有机肥，勤浇水草莓着色好，含糖量高。成熟期可提前4-5天，草莓适宜在微酸性和中性的土壤中生长，要求PH值5.8-6.5PH值在4以下或8以上，就会出现生长发育障碍，表层有机质含量达到1.5%-2%才能生长良好，才能获得优质高产。

草莓对土壤中氮、磷、钾含量有一定要求。

草莓的繁殖与育苗

繁殖方法：匍匐茎分枝繁殖法、新茎分枝繁殖法、组织培养繁殖法、种子繁殖法。

育苗的方法：假植育苗、高山育苗、营养钵育苗、无土栽培育苗、遮光育苗、夜冷育苗。本次实习主要应用组织培养繁殖育苗。

组织培养法的具体步骤：

1接种分化、选取强壮粗实的短缩茎，除去叶，切下顶部放入消毒液后，用清水洗净，在无菌条件下切取茎尖约3毫米，置入无菌培养基的三角瓶内，放入无菌室恒温22-26℃，培养30-75天，培养成1.5-2.0厘米的无根苗30-50株。

2继代繁殖、将培养出的无根苗进一步扩大繁殖，分成5-10瓶，培养7-15天，又可以长满无根苗，可以连续十代。根据生产需要决定继代培育次数。

3生根培养、采用某些激素配成一定浓度和适宜比例的培养液，将无根苗在三角瓶培养液中培养，可促使其发根。

4驯化到自养阶段、由试管移植到盆内，于18-25℃温度下培养15-20天即成无病毒苗，再进入苗圃培育。

主要病虫害与防治

引起草莓的主要病害：草莓病毒病、草莓灰霉病、草莓白粉病、草莓炭疽病、草莓黄萎病、草莓蛇眼病、草莓轮纹病、草莓根腐病。

主要虫害：蛴螬、蚜虫、红蜘蛛、叶甲、斜纹叶蛾。

防治：主要采取综合防治的原理，是检疫性病虫害的采取植物检疫策施，还有生物防治、农业防治、物理防治、化学防治等。例如对草莓病毒病的防治采用茎尖组织繁殖法，因病毒是通过维管束进行传播的在茎尖生长点还没有分化出为维管束的部分是不带病毒的，所以取草莓茎尖1-3毫米的分生组织进行培养可得到无病毒苗。

对主要的害虫采用见效快的化学防治策施。

在做本次实验的过程中,使我体会到了什么叫认真和细心,我是一个粗心的的孩子,对待事情一直都是马马虎虎,做本次实验需要配制大量的母液,它的需要量和配制培养基时的放入次序要弄清,一步错误满盘结输,分化培养基和生根培养基一定要分清,唯一的差别在于分化培养基内附加BA(6-苄基氨基嘌呤)而生根培养基中附加IBA(吲哚乙酸)。另外,培养基的煮沸时间和温度一定要把握住，时间和温度过高和过低都对培养基的成分和培养效果有一定的影响，过高可能导致培养基浑浊不清，有些成分可能受热分解掉了。过低时培养基的受热时间短对培育苗的生长发育有一定的影响。培养基作好以后一定要贴好标签，以防混淆了两种培养基。在做本此实验的过程中使我体会到什么是耐心，在做外植体分化时，由于草莓的顶梢茎尖比较小，但是还得用镊子将茎尖的外面的包叶剥去，用镊子将幼叶一一剥去，剪取尽可能小的茎尖（０.１－０.３ＭＭ）有时候由于操作上的失误造成草莓苗的病菌感染，需要将草莓苗进行消毒，时间和消毒剂的用量一定要谨慎操作，时间过长导致草莓苗的中毒死亡，消毒剂量浓度低消毒不彻底，为了防止草莓苗的感染都在无菌台上进行操作，实验用的镊子剪刀都要用一次就消毒一次，一般用酒精灯外焰烧几分钟就可以了，实验时双手也要进行酒精消毒，防止其他外来菌体的污染，再接种草莓苗时要靠近酒精灯的火焰不可太近也不能太远。太近会使草莓苗受热过高导致烫伤或烫死，太远可能会导致其他细菌的污染，试管口的棉塞不能随意乱放，以防污染。接种完以后将三角瓶放入恒温箱里进行培养，控制好光照、光周期、温度、时间。并定期观察草莓苗的生长和生根情况，有时由于没有将草莓苗插入培养基内，生长一段时间后基部脱离了培养基，这时需要将草莓苗重新插入到培养基内，必要时换一个三角瓶培养基，再进行一次外植体茎尖的剪取，千万不可马虎偷懒大意。本次实习使我所学的知识与实践得到了紧密结合，获得了许多实战性经验，将许多知识运用到实践中，获得更好更高的丰产。在次此实习过程中，我院赵岩老师和甄文超教授给予了许多经验性的指导，研究生刘雪静学姐和其他师兄给予了许多技术性和实战性的指导，在实习过程中各位老师学姐师兄给我讲了许多为人处事的道理，为以后走向社会建设国家打下一个基础。在次对各位老师学姐师兄表示衷心感谢。

总之，通过本次实习使我掌握了许多东西，受益匪浅。